熒光蛋白GFP在激發(fā)光源的照射下,人眼能明顯的看到熒光,而一起被廣泛應(yīng)用于各種生物研究,主要特性如下
1、易于檢測(cè)
GFP熒光反應(yīng)不需外加任何反應(yīng)底物,酶或其他共反應(yīng)銀子,也就不存在這些物質(zhì)可能難于進(jìn)入細(xì)胞的問(wèn)題,只需紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā),即可發(fā)出綠色熒光,GFP發(fā)射的熒光用斗眼或用光顯微鏡就可以檢測(cè)到。靈敏度高,對(duì)于單細(xì)胞水平的表達(dá)也可識(shí)別,同時(shí)還可利用其進(jìn)行定量檢測(cè)。由于GFP對(duì)活細(xì)胞基本無(wú)毒害,因此無(wú)需特殊處理就可以很方便進(jìn)行活體觀察。而且,具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得,使在同一細(xì)胞中同時(shí)分析兩種不同蛋白或啟動(dòng)子成為可能,可以用于法語(yǔ)細(xì)胞學(xué)、藥物篩選、分析診斷燈研究。這就使GFP有可能成為一種快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的標(biāo)記蛋白,GFP基因作為報(bào)道基因有很廣泛的用于。
2、熒光穩(wěn)定
GFP無(wú)光漂白現(xiàn)象,在很大PH范圍內(nèi)(PH7-12)都可以正常發(fā)出熒光,手溫度的影響也很小,只有在超過(guò)65℃時(shí)才會(huì)變性,即熒光消失。熒光顯微鏡強(qiáng)光照射下,GFP抗光漂白能力比熒光素強(qiáng),特別是在450~490nm藍(lán)光波長(zhǎng)下更穩(wěn)定,單在340-390nm或395-440nm范圍內(nèi),仍會(huì)發(fā)生光漂白現(xiàn)象。對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間光照,GFP也有很好的耐受性,根據(jù)Sheen等的研究,GFP在受體內(nèi)表達(dá)時(shí)可以持續(xù)得到不低于10min的熒光。
3、廣譜性
首先表現(xiàn)在它的表達(dá)幾乎不受種屬范圍的限制,在微生物、植物、動(dòng)物中都獲得了成功的表達(dá);其次就是沒(méi)有細(xì)胞種類(lèi)和位置的限制,在各個(gè)部位都可以表達(dá),在紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下發(fā)出肉眼可見(jiàn)的熒光。
4、易于載體構(gòu)建
由于GFP較小,只含有238個(gè)氨基酸,編碼GFP的基因序列也比較短,約2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起構(gòu)建多種質(zhì)粒,而不至于使質(zhì)粒過(guò)大影響轉(zhuǎn)化頻率。盡管野生型的GFP在某些植物和動(dòng)物中表達(dá)很弱,但是可以通過(guò)更換GFP生色團(tuán)氨基酸改變堿基組分、出去內(nèi)含子、更換強(qiáng)啟動(dòng)子燈方法加強(qiáng)表達(dá)。Connack等篩選出三種含Ser65突變的突變體,在大腸桿菌中表達(dá)時(shí),紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下的熒光強(qiáng)度比野生型高約100倍。
5、無(wú)毒害
Chalfie等的研究表明:GFP對(duì)生活細(xì)胞基本無(wú)毒害,Sheen等的研究進(jìn)一步表明:在玉米中,即便GFP在細(xì)胞中的表達(dá)量很高時(shí),對(duì)細(xì)胞也不會(huì)產(chǎn)生明顯毒害,但是至今我們還不了解它對(duì)植物再生能力的影響。
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